本文摘要本文围绕LifeNet Health人原代肝细胞PHH、人肝非实质细胞及配套专用培养基展开介绍重点梳理不同类型肝脏细胞在药物代谢、肝毒性检测、MASH模型、肝病机制研究及体外肝脏模型开发中的应用价值为科研人员和药物研发团队提供细胞模型选型参考。关键词人原代肝细胞、PHH、人肝非实质细胞、Kupffer细胞、肝星状细胞、肝内皮细胞、肝细胞培养基、药物肝毒性检测、MASH模型、LifeNet Health一、为什么药物研发需要高质量人原代肝细胞模型在药物研发过程中肝脏是药物代谢、毒性评价和药物相互作用研究的核心器官。人原代肝细胞Primary Human HepatocytesPHH由于保留了人体肝脏细胞的关键代谢功能因此被广泛用于代谢稳定性、肝毒性检测、CYP450酶诱导、药物相互作用和肝病模型研究。对于进口人原代肝细胞而言复苏后存活率、贴壁能力、CYP450酶活性、批次稳定性、供体信息完整度以及疾病模型覆盖范围都会直接影响实验数据的可靠性和可重复性。LifeNet Health依托严格的供体筛选流程、成熟的细胞分离技术和完善的质量控制体系能够提供多类型人原代肝细胞、人肝非实质细胞及配套培养基产品帮助科研人员根据不同实验目的搭建更适合的体外肝脏研究模型。对于开展药物肝毒性检测、MASH模型研究、药物代谢评估及体外肝脏模型开发的用户也可以进一步参考LifeNet Health相关产品资料https://www.mine-bio.com/LifeNet_PrimaryCells_Medium/?utm_sourcecsdnutm_mediumreferralutm_campaignlifenet_article二、LifeNet Health肝脏细胞体系适合哪些研究方向LifeNet Health肝脏细胞体系覆盖健康供体和多种疾病状态供体并可提供不同年龄阶段来源的肝细胞包括新生儿、儿童、青少年及成人肝细胞。对于研究年龄相关药物代谢差异、儿科药物开发、脂肪肝及MASH疾病机制等方向而言这类供体覆盖能够帮助研究人员构建更贴近真实临床人群的实验模型。除肝实质细胞外LifeNet Health还可提供人肝非实质细胞包括Kupffer细胞、肝星状细胞和肝内皮细胞并支持同一供体来源的细胞组合。这种“肝实质细胞肝非实质细胞肝组织样本”的匹配体系有助于研究人员在体外重建更完整的肝脏微环境减少不同供体来源带来的背景差异从而更好地用于炎症、纤维化、药物转运和肝病机制相关研究。三、人原代肝细胞PHH如何按应用场景选择LifeNet Health人原代肝细胞可根据实验周期、贴壁能力和疾病背景进行选择。对于药物代谢稳定性、内在清除率测定等快速实验可优先考虑成人悬浮型或短期贴壁型人原代肝细胞。这类细胞通常经过主要I相和II相代谢酶活性表征适合早期药物筛选和代谢评估。对于CYP酶诱导、药物相互作用、长期肝毒性检测等研究则可选择成人中期或长期贴壁型人原代肝细胞。其中中期贴壁型可稳定培养5-9天长期贴壁型可稳定培养10-14天能够更好地支持长周期实验。对于慢代谢药物、慢性肝毒性风险评估以及复杂培养体系构建较长的贴壁培养周期可以提供更稳定的实验窗口。针对脂肪肝、MAFLD/MASH和肝硬化等疾病机制研究LifeNet Health可提供高BMI、MAFLD/MASH相关供体来源肝细胞。这类细胞可附带NAS评分、纤维化分期以及HE/三色染色图像有助于研究人员结合病理背景开展疾病模型构建和药物筛选。针对儿科药物研发和发育阶段代谢差异研究也可选择新生儿、儿童或青少年来源肝细胞用于观察不同年龄阶段药物代谢酶表达特征。图1. 成人原代肝细胞左复苏后明场右培养第4天相差显微镜图像四、人肝非实质细胞为何是复杂肝病模型的重要补充肝脏并不是由肝实质细胞单独发挥功能的器官。人肝非实质细胞虽然占比低于肝实质细胞但在免疫调节、炎症反应、纤维化进程、血管微环境和药物转运中具有重要作用。因此在肝毒性研究、MASH模型、肝纤维化研究和体外肝脏模型构建中仅使用人原代肝细胞往往难以完整模拟体内肝脏微环境。Kupffer细胞是肝脏固有免疫细胞主要参与炎症反应和吞噬作用可用于肝脏免疫研究和炎症性肝病模型。该类细胞可验证脂多糖LPS诱导的细胞因子响应但不增殖、无法传代复苏后可直接用于实验并可维持培养长达7天。人原代肝星状细胞是肝脏纤维化进程中的重要效应细胞可用于肝纤维化机制研究和抗纤维化药物筛选。该类细胞经免疫细胞化学鉴定纯度并可进行传代培养。人原代肝内皮细胞则主要参与肝脏微循环和物质交换调节经流式细胞术检测特异性标志物表达可用于肝脏血管生成、药物转运和肝脏屏障相关研究。五、配套培养基为什么会影响原代肝细胞实验结果人原代肝细胞对培养条件非常敏感复苏、铺板和维持阶段所需营养环境并不完全相同。如果培养基与细胞状态不匹配可能会导致复苏存活率下降、贴壁效果不佳、代谢功能衰减或实验重复性变差。因此在使用人原代肝细胞时配套培养基的选择同样重要。LifeNet Health提供专属配套人原代肝细胞培养基包括复苏培养基、铺板培养基和维持培养基。复苏培养基用于提高冻存细胞复苏后的产量和存活率铺板培养基用于促进细胞贴壁维持培养基则用于支持细胞在实验周期内保持功能稳定。对于药物代谢、肝毒性检测和CYP诱导等实验而言稳定的培养条件是获得可靠数据的重要基础。图2. LifeNet Health人原代肝细胞培养基清单六、人原代肝细胞实验操作需要注意哪些关键步骤在人原代肝细胞验收和储存阶段冻存细胞签收后应立即转移至气相液氮-135℃至-190℃中保存避免长时间放置在室温或干冰环境中以免影响细胞活性或造成标签开裂。培养基到货后HHTM、HHPM、HHCM基础液应按照要求置于2-8℃保存补充剂则需置于-20℃保存。在复苏操作中建议提前20-30分钟将HHTM复苏培养基置于37℃水浴预热。细胞从液氮中取出后应在37℃水浴中快速解冻90-100秒直至仅剩少量冰块。随后用70%酒精擦拭冻存管外部并将细胞悬液转移至含49mL预热HHTM的50mL离心管中。完成室温100×g离心8分钟后轻轻吸弃上清再加入3-5mL预热HHPM铺板培养基重悬细胞并进行细胞计数、存活率和产量评估。在铺板培养阶段应参考每批次CoA中的推荐接种密度用HHPM培养基调整细胞浓度并将细胞悬液加入胶原蛋白包被的培养板中。接种后将培养板放入37℃、5%CO₂培养箱并按“南北向-东西向-8字形”轻轻摇晃三次使细胞分布均匀。在培养前60分钟内每隔15分钟重复摇晃一次有助于改善贴壁均匀性。接种后2-4小时可吸出培养液并更换为预热的HHCM维持培养基之后每天更换新鲜HHCM培养基直至实验结束。七、LifeNet Health肝脏细胞常见问题Q1LifeNet Health肝细胞供体筛选包含哪些内容LifeNet Health肝细胞供体经过严格筛选包括完整的病史调查、社会史调查和传染病检测。所有供体均需进行HIV、HBV、HCV、梅毒和弓形虫等检测并提供详细供体信息及病理学报告。Q2不同实验应该如何选择肝细胞类型如果进行快速代谢实验可选择成人悬浮型或短期贴壁型人原代肝细胞如果进行酶诱导和药物相互作用研究可选择中期或长期贴壁型如果研究MAFLD/MASH相关疾病机制可选择高BMI或MAFLD/MASH供体来源肝细胞如果开展儿科药物研发或年龄相关代谢研究可选择新生儿、儿童或青少年肝细胞。Q3Kupffer细胞、肝星状细胞和肝内皮细胞是否都可以传代Kupffer细胞不增殖无法传代通常复苏后直接用于实验。肝星状细胞和肝内皮细胞可以传代1-2次但建议尽量使用早期传代细胞以保证实验结果更接近原代状态。八、总结LifeNet Health人原代肝细胞、肝非实质细胞及配套培养基构成了较完整的体外肝脏研究工具体系可为药物代谢稳定性评价、药物相互作用研究、肝毒性检测、MASH模型、肝纤维化研究及器官芯片等方向提供更具生理相关性的细胞模型支持。对于药物研发和肝病研究而言选择复苏活率稳定、酶活表征完整、供体信息详尽且配套培养条件成熟的人源肝脏细胞产品有助于提高实验数据质量降低模型不稳定带来的研发风险。本文基于LifeNet Health公开资料由其中国提供商上海曼博生物整理用于科研信息分享、实验参考等。曼博生物可提供LifeNet Health人原代肝细胞、PHH、人肝非实质细胞、Kupffer细胞、肝星状细胞、肝内皮细胞、人原代肝细胞培养基、肝细胞复苏培养基、铺板培养基、维持培养基及药物肝毒性检测、药物代谢、MASH模型研究相关产品与技术支持助力药物研发、肝毒性检测、肝病机制研究及体外肝脏模型开发应用。
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